198 ARTICLE TECHNIQUECrinothérapie / Crinotherapy Nous nous sommes ensuite intéressés à l’expression des marqueurs de maturation des glandes sébacées Muc-1 et MCR5 après 49 jours en culture afi n de démontrer que notre modèle en trois dimensions est bien mature et exprime des marqueurs de différenciation terminale (Figure 2). Après avoir vérifi é que notre modèle était proche des conditions physiologiques FIGURE 2 : et que les glandes sébacées étaient au VISUALISATION DE GLANDES SEBACÉES CULTIVÉES PENDANT 49 JOURS SELON LA MÉTHODE stade mature avec une forte production « SANDWICH ». MARQUAGE DE MUC-1 EN ROUGE ET MC5R EN VERT. LES IMAGES SONT de sébum (De Bengy et al. soumis), nous OBTENUES À L’AIDE D’UN MICROSCOPE À FLUORESCENCE. ÉCHELLE=100 μM. avons évalué l’effi cacité d’un ingrédient sur VISUALIZATION OF SEBACEOUS GLANDS CULTIVATED FOR 49 DAYS WITH THE “SANDWICH” les glandes sébacées. En Figure 3, nous METHOD. STAINING OF MUC-1 IN RED AND MC5R IN GREEN. PHOTOS OBTAINED BY montrons qu‘un ingrédient, Bix’Activ® FLUORESCENCE MICROSCOPY. SCALE BAR 100μM. (extrait de Bixa orellana), permet de diminuer la quantité de Muc-1, prouvant que la maturation des sébocytes est diminuée. En Figure 4, nous avons observé les lipides dans les glandes sébacées avant et après traitement avec Bix’Activaprès coloration® au rouge du Nil. Nous avons démontré que Bix’Activest capable de dépléter® les glandes sébacées de leur contenu en lipides. Les gouttelettes lipidiques semblent être moins abondantes et plus Cr petites en présence de Bix’Activ.® Discussion FIGURE 3 : VISUALISATION DE MUC-1 DANS DES GLANDES SEBACÉES CULTIVÉES PENDANT SIX JOURS L’objectif de cette étude était de dévelop- SELON LA MÉTHODE « SANDWICH » SANS INGRÉDIENT (NON TRAITÉ) ET AVEC BIX’ACTIV® per une méthode fiable pour étudier le À 0,02 %. LE MARQUAGE DE MUC-1 EST EN VERT AVEC UNE CONTRE-COLORATION EN ROUGE. IMAGES OBTENUES PAR MICROSCOPIE CONFOCALE. ECHELLE=100 μM. VISUALIZATION OF MUC-1 IN SEBACEOUS GLANDS CULTIVATED FOR SIX DAYS WITH THE “SANDWICH” METHOD WITHOUT ACTIVE INGREDIENT (UNTREATED) OR WITH BIX’ACTIV AT® 0.02%. MUC-1 STAINING IN GREEN, WITH A COUNTERSTAINING IN RED. PHOTOS OBTAINED BY CONFOCAL MICROSCOPY. SCALE BAR 100μM. In Figure 1, we fi rst showed that after 49 days in culture, the cultured sebaceous glands keep their morphology. In the sebaceous gland, proliferating sebocytes express Ki67, as usual mitotic cells. Once they progress in the differen- tiation stage, they express markers of sebaceous lineage including cytokeratin 7 (K7) and epidermal membrane antigen (EMA) also called Mucin1 (Muc1) and Melanocortin 5 receptor (MC5R). K7 characterizes the undifferentiated cells present at the periphery of the glands while Muc-1 and MC5R characterize the terminal mature sebocyte differentiation present at the center of the glands. Muc1 is expressed at the membrane of the sebocyte, and helps FIGURE 4 : the migration of the sebocytes in the center GLANDES SEBACÉES CULTIVÉES SELON LA MÉTHODE « SANDWICH » PENDANT 6 JOURS SANS of the gland (Jung et al. 2017). At the INGRÉDIENT (NON TRAITÉ) ET AVEC BIX’ACTIVA0,02 %. LES GOUTTELETTES LIPIDIQUES SONT® COLORÉES AVEC DU ROUGE DU NIL (JAUNE) ET LE NOYAU AVEC LE DAPI (BLANC). gland’s center, the cell volume increases, SEBACEOUS GLANDS CULTURED WITH THE “SANDWICH” METHOD FOR 6 DAYS WITHOUT ACTIVE the cells undergo apoptosis and sebum is INGREDIENT (UNTREATED) OR WITH BIX’ACTIV AT 0.02%. LIPID DROPLETS WERE STAINED WITH NILE® excreted. Lipid droplets are stained with RED (YELLOW) AND NUCLEI WITH DAPI (WHITE). PHOTOS OBTAINED BY CONFOCAL MICROSCOPY. Nile Red coloration. 2018 - Guide des ingrédients cosmétiques Expression Cosmétique