Crinotherapy / Crinothérapie TECHNICAL ARTICLE 197 culture, contenant ou non 0,02 % d’extrait Résultats Dans la Figure 1, nousmontrons qu’après aqueux de Bixa orellana (Bix’activ) a été® 49 jours de culture les glandes sébacées changé tous les 3-4 jours pendant six jours. Jusqu’ici, il n’existait pas de modèle de conservent leur morphologie. culture in vitro de glandes sébacées qui Dans la glande sébacée, les sébocytes • Isolation des sébocytes et nous permette d’étudier la différencia- normaux humains qui prolifèrent, caractérisationdes glandes sébacées tion complète des glandes sébacées expriment Ki67 comme toutes les cellules Les glandes sébacées ont été fi xées avec et d’observer la production de sébum qui ont une activité mitotique. Au cours 4 % de formaldéhyde (Sigma-Aldrich) puis, physiologique. En fait, il a été montré de leur différenciation, ils expriment les elles ont été marquées avec des anticorps que les lignées cellulaires de sébocytes marqueurs de lignée sébacée comme la MC5R (Abcam) et Muc-1 (Acris Antibody). ou les cellules primaires cultivées in vitro cytokératine 7 (K7), les antigènes de la Le marquage a été analysé à la fois avec un ne se différencient pas complètement membrane épidermique (EMA) appelés microscope à fl uorescence et un micros- en monocouche, comparativement aux aussi Mucine-1 (Muc-1) et les récepteurs 5 cope confocal (LSM780, Zeiss). conditions in vivo en trois dimensions. de la mélanocortine (MC5R). K7 est Bien que les sébocytes puissent être caractéristique des cellules indifférenciées • Coloration rouge du Nil et DAPI avec cultivés jusqu’au 6ème passage et qu’ils présentes à la périphérie de la glande analyse en 3D préservent des caractéristiques impor- sébacée alors que Muc-1 et MC5R sont Après application du rouge du Nil et du tantes de ce type cellulaire, leur différencia-présents au centre de la glande sébacée, DAPI, les images ont été capturées à partir tion est incomplète et ils ne génèrent pas de à un stade mature de différenciation du d’un microscope confocal en utilisant un lipides spécifi ques des sébocytes comme sébocyte. Muc-1 est exprimé au niveau laser à une longueur d’onde d’excitation le squalène, un marqueur spécifi que de la de la membrane du sébocyte, et permet de 405 nm et de 561 nm. Deux couches sébogenèse (Xia et al. 2009). Pour pallier la migration des sébocytes au centre de la d’images ont été obtenues par zone, sur les à ce problème, nous avons développé glande sébacée (Jung et al. 2017). Au centre deux canaux. Chaque couche d’image a été un modèle 3D de glandes sébacées qui de la glande sébacée, le volume cellulaire traitée pour obtenir une projection en z avecpermet de produire du sébum avec du augmente, les membranes éclatent et les une intensité maximale et une visualisation squalène (entre 4 et 11 µg/mg de tissu en cellules rentrent en apoptose pour libérer le en trois dimensions. Les glandes sébacées fonction du type de phototype II, IV et V, sébum. Les gouttelettes lipidiques peuvent de chaque condition ont ensuite été recons- données non présentées). être colorées avec du rouge du Nil. truites en trois dimensions (logiciel AMIRA)et une vidéo a été réalisée (Adobe Premie- Cr rePro) pour observer les glandes sébacées sous tous les angles. Les images présen- tées en Figure 4 sont issues de cette vidéo. well and the medium was changed every FIGURE 1 : 3-4 days. Half of them were treated with MORPHOLOGIE DES GLANDES SEBACÉES APRÈS 1 ET 49 JOURS EN CULTURE. a water extract of Bixa orellana at 0.02% MORPHOLOGY OF THE SEBACEOUS GLAND AFTER 1 AND 49 DAYS IN CULTURE. (Bix’Activ) for 6 days.® • Isolated sebocytes and sebaceous gland obtain a z-projection of maximal intensity incomplete differentiation as they are usually characterization for a 3D visualization. grown under two-dimensional conditions, Sebaceous glands were first fixed with We created a 3D reconstruction of the while three-dimensional relationships occur formaldehyde 4% (Sigma-Aldrich). Then, sebaceous glands in each condition (AMIRA in vivo. While cultured human sebocytes they were stained with MC5R (Abcam ) and software) and a video was realized (Adobe can be grown up to six passages and Muc-1 antibodies (Acris Antibody). Staining PremierePro) to observe the sebaceous preserve important sebocytic characteristics, was analyzed with either fl uorescence or glands from all angles. Images presented they undergo an incomplete terminal confocal microscope (LSM780, Zeiss). in Figure 4 have been extracted from the differentiation in vitro and don’t generate video. specifi c lipids of sebocytes like squalene, • Nile red and DAPI staining’s with 3D the specifi c marker of sebogenesis (Xia et analysis Results al. 2009). Following Nile Red and DAPI application, To overcome this problem, we genera- imaging was performed with a confocal So far, there is a lack of adequate ted a 3D sebaceous gland model which microscope with the excitation laser at in vitro models to study sebaceous gland resulted in the production of real sebum, 405nm and 561nm. We acquired two differentiation, and observe physiological with presence of squalene (between 4 and stacks of images per area for both channels. sebum production. In fact, available 11µg/mg of tissue depending on donor Each stack of images has been treated to sebocyte cell lines or primary cells show onlyphototypes II, IV and V, data not shown). The global information on cosmetics & fragrances Guide of cosmetic ingredients - 2018